膠原酶背景介紹

　　膠原酶的化學名為膠原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結構，而不損傷其它蛋白質和 組織。膠原酶的化學本質是一種蛋白質，因此，這對溫度、PH和導致蛋白質變性的各種因素均非常敏感，極易受到外界條件的影響而改變其本身的構象和性質。

　　膠原酶(collagenase)是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬，內含較多結締組織或膠原 成分時，用胰蛋白酶解離細胞的效果較差，這時可采用膠原酶解離細胞法。 膠原酶僅對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終 濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞膠原酶，要根據所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。

　　1、膠原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和腎上腺組織細胞的分離。用于消化組織中連接部分使其成為單個細 胞，用于哺乳動細胞的分離。

　　2、膠原酶Ⅱ適用于肝臟，骨，甲狀腺，心臟和唾液腺組織。

　　3、膠原酶Ⅳ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織。

　　4、膠原酶Ⅴ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離，將結締組織分離成單個細胞。

　　膠原酶的配置：

　　膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配制、消毒滅菌和儲藏。

　　注意：

　　因為Ⅰ型膠原酶分子顆粒比胰酶大，不容易過濾，因此可以用蔡式濾器過濾除菌。

　　鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培養液配制。

　　膠原酶的使用

　　1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊

　　2.將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的膠原酶溶液，旋緊蓋子(密封燒瓶)。

　　3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內，膠原酶每隔3min振搖一次，如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。消化時間與組織的類別很有關系，對于某些腫瘤組織或其他較致密結締組織，消化時間4~48h，對于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min，也可以根據具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經搖動即成細胞團或單個細胞，可以認為已消化充分。上皮組織經膠原酶消化后，由于上皮細胞對此酶有耐受性，可能仍有一些細胞團未*分散，但成團的上皮細胞比分散的單個上皮細胞更易生 長，因此，如無特殊需要可以不必再進一步處理。

　　4.膠原酶收集消化液(有時含個別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網過濾)，離心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者無血清培養液離心漂洗1~2次，去除上清，加培養液制成細胞懸液，接種培養瓶。