羧甲基纖維素CM-52 層析填料樹脂的操作步驟 ：

　　1、裝柱：

　　a、所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體好做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時(shí)裝柱即可。

　　b、在柱子下端加入 20%乙醇， 以除去柱子中的空氣， 關(guān)閉柱子出口， 在柱內(nèi)保留少量的 20%乙醇。 20%乙醇容易產(chǎn)生氣泡，可以在里面加 1%吐溫避免氣泡產(chǎn)生。也可以換成純水裝柱子，但是需要把填料中的 20%乙醇也換成純水，具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進(jìn)行，也可以小心傾去填料上的 20%乙醇，再換成 5 倍體積的純水，反復(fù)沉淀去上清，5 次左右就可以用于裝柱子。

　　c、此填料顆粒比較細(xì)，所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網(wǎng)，不能漏，也可以取點(diǎn)填料加到篩網(wǎng)上試試，如果沒有問題再將填料連續(xù)倒入柱子時(shí)，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流，以減少氣泡的產(chǎn)生，讓填料先自然沉降到填料體積不再變化，而填料和上面的液體很好分層，上層溶液*澄清，就可以開泵用適當(dāng)?shù)牧魉賶褐樱盍象w積不再變化后，再把轉(zhuǎn)換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速。

　　d、在裝柱子前，填料從冰箱中取出至少要室溫放置 2-3 個(gè)小時(shí)，這樣避免裝柱子時(shí)由于溫度變化而使柱子中產(chǎn)生氣泡。

 

　　2、蛋白的結(jié)合：

　　樣品的鹽濃度和 pH 要盡量和平衡柱子的緩沖液*，鹽濃度過高或者 pH 帶低也許掛不上，所以要根據(jù)自己的樣品做適當(dāng)調(diào)整。

 

　　3、蛋白的洗脫：

　　a、樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。

　　b、一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

　　c、介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和 pH 值。鹽濃度小，介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附較牢。用 DEAE 介質(zhì)時(shí)，推薦的 pH 值是大于目標(biāo)產(chǎn)品等電點(diǎn) 1 個(gè)單位。

 

　　4、再生清洗：

　　a、每次用完好用 0.5MNaOH 含 2M NaCl 洗 5 個(gè)床體積，再用水洗 5 個(gè)柱床體積，然后用 20%乙醇保存， 使用 3-5 次后在水洗之后再用 70%的乙醇或 30%異丙醇都含 1%吐溫洗 5 個(gè)柱床體積， 后 20%的乙醇流洗 5 個(gè)柱床體積。

　　b、有機(jī)溶劑和水混合很容易產(chǎn)生氣泡，為了避免這樣情況，可以把配好的有機(jī)溶劑在室溫放置，再使用，這樣可以避免氣泡進(jìn)柱子而導(dǎo)致柱子不能正常使用。